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小鼠心鈉肽Pro-ANP(1-98)ELISA試劑盒

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 產(chǎn)品時(shí)間:2024-08-10
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  • 產(chǎn)品簡(jiǎn)介

小鼠心鈉肽Pro-ANP(1-98)ELISA試劑盒檢測(cè)原理:

采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。

保存2-8℃

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.裂解細(xì)胞:用胰酶消化后,離心收集細(xì)胞,每瓶細(xì)胞用100μl細(xì)胞裂解液,用吸管吹打數(shù)下,使細(xì)胞和裂解液充分接觸,冰浴5min,12000 r/min于4℃離心30min,取上清,用于以下實(shí)驗(yàn)。

6. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

小鼠心鈉肽Pro-ANP(1-98)ELISA試劑盒操作步驟

1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔,空白孔什么都不加;標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

3. 待測(cè)樣本孔各加待測(cè)樣本50μL;

4. 隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中(空白孔不加)加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

6. 所有孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7. 所有孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

結(jié)果判斷

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

小鼠心鈉肽Pro-ANP(1-98)ELISA試劑盒

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