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細胞培養(yǎng)起來感覺會很簡單,但是有時候也會出現(xiàn)各種不順的問題 ,例如:污染,生長緩慢,變形,死亡率過高…..,畢竟細胞是體外培養(yǎng)的,在培養(yǎng)的時候會受到各種外界因素的影響,培養(yǎng)基、血清、孵育溫度、C02濃度等,除此之外還有抗生素……
一般來說細胞培養(yǎng)是不需要加抗生素,因為培養(yǎng)過程必須要無菌操作。如果實驗室污染嚴重,建議*打掃一下,擦拭消毒、熏蒸或者紫外照射殺菌。然后把細胞實驗涉及到的試劑都做下空培,包括使用的胰酶,胎牛血清等。如果實驗室無菌條件優(yōu)異,細胞培養(yǎng)可以不加抗生素,因為抗生素的藥效水平和毒性水平非常接近。特別是用于細胞治療的培養(yǎng)。
若當心細胞感染,可以適當添加一些抗生素預防,如果已經(jīng)有污染,建議按照以下方案添加:
1、常用的是青霉素、鏈霉素聯(lián)合抑制細菌,即所謂的“雙抗”,主要針對革蘭氏陽性菌、陰性菌;對于細菌的感染也可用慶大或卡那霉素;
2、如果真菌污染嚴重,可用兩性霉素/制霉菌素控制;
3、若為支原體污染, 可以用sciencell的支原體抑制劑。在培養(yǎng)基中加入新鮮的支原體抑制劑溶液,每3-4天更換一次。一兩周內(nèi)的足以消除污染??梢杂行У目梢圆闅⒏鞣N原因感染的支原體。
抗生素多加對細胞無益。加抗生素的主要問題是操作不慎造成的污染未必能及時發(fā)現(xiàn),造成后期較大的損失。
青鏈霉素是廣譜抑菌劑,對革蘭氏陰性和陽性細菌有抗菌性,青霉素影響細菌細胞壁合成的終末步驟,在轉(zhuǎn)肽反應步驟一直多肽鏈的延伸;鏈霉素與核糖體的30S亞基單位結(jié)合,阻斷細菌蛋白質(zhì)的組成。比較常用 。
一旦細胞污染,處理辦法扔掉,查找原因,全面預防。如果細胞是經(jīng)過大量工作或高價才得到的,扔掉實在可惜,可以針對污染源加抗生素。也可以不加抗生素進行單克隆有限稀釋至96孔板,再克隆化。
但是污染帶來的實驗影響和損失不可估量,主要的是平常都要做好細胞房的管理和消毒工作。防止污染的發(fā)生。
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