人臍帶間充質(zhì)干細胞特性，人臍帶間充質(zhì)干細胞來源

代號：hUC-MSCs細胞；HUMSC細胞

中文名稱：人臍帶間充質(zhì)干細胞

代數(shù)：P1或 P3代

來源：東方醫(yī)院

hUC-MSCs細胞；中文名稱：人臍帶間充質(zhì)干細胞 來源：上海市東方醫(yī)院  出售P1代和P3代
取自滿月自然分娩的胎兒臍帶，檢測結(jié)果表明，本產(chǎn)品無細菌、真菌、支原體和病毒污染，表達多種間充質(zhì)干細胞特異標(biāo)記，具有良好的增殖和分化潛能，可以分化為成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞等。
生長特性：貼壁生長（形態(tài)紡錘狀，成纖維細胞樣）
培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基：DMEM/F12 90%+FBS 10%+b-FGF 10ng/mL （建議使用本公司間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基）
溫度：37℃     氣相：95%空氣，5%二氧化碳
培養(yǎng)瓶/皿：使用無血清培養(yǎng)基時應(yīng)使用針對間充質(zhì)干細胞特別TC處理的培養(yǎng)瓶/皿，或使用纖連蛋白或其他促貼壁試劑包被過的培養(yǎng)瓶/皿
細胞特性：
經(jīng)測試，本產(chǎn)品具有良好的增殖和分化潛能，可分化為成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞等。流式檢測結(jié)果顯示，CD29、CD44、CD73、CD105、CD166陽性，CD11a、CD34、CD45陰性。
運輸保存：
采用干冰保存運輸
收到細胞時，若干冰已經(jīng)*融化，請立即將細胞復(fù)蘇培養(yǎng)；若尚留有干冰，請立即將細胞放入液氮中保存待用，請按條件貯存細胞，切不可將細胞置于高溫環(huán)境。
 
產(chǎn)品承諾：
人臍帶間質(zhì)干細胞的體外培養(yǎng)周期有限。建議使用本公司配套的培養(yǎng)基和正確的培養(yǎng)方法來解凍、傳代，以此保證細胞具備良好的增殖和分化能力。
 
用途：
本產(chǎn)品只提供給進一步的科研使用，不可應(yīng)用于治療等其他方面。
1.用75%酒精噴灑整個培養(yǎng)瓶消毒，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進行1-3小時的緩沖，.然后置于無菌操作臺，打開瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6 mL新鮮培養(yǎng)基（以T25培養(yǎng)瓶為例）并置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液以及傳代，一般2到3天換一次液；
2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%，需要對其進行傳代，次傳代比例為1:3，之后推薦傳代比例為1:5到1:10；
3傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液與DPBS置于37°預(yù)熱，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml DPBS，輕晃洗滌后棄去。使用DPBS將胰酶稀釋4倍，往瓶中加2 ml稀釋后的胰酶，置于室溫孵育消化（次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為好的消化時間，記錄好的消化時間，以便于下次消化），消化好后加入2ml含血清的*培養(yǎng)基或其他胰酶中和液終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落，然后收集細胞懸液并吹打成單個細胞懸液，1200rpm離心5min，棄上清，加入*培養(yǎng)基重懸細胞，進行傳代。
保存：凍存條件：80%*培養(yǎng)基+10%FBS+10%DMSO
(備注：建議使用本公司的冷凍液（H-W-100），用4度保存的冷凍液直接重懸細胞，不能預(yù)熱后使用。)
保存條件：液氮存儲
常見問題以及解決方案
1.培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。
2.收到細胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加 10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間長不宜超過 72 小時）
3.細胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2小時后觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留8-10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細胞生長至匯合度80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。
 
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